RMCE : Échange de cassettes par recombinase

La technologie d'échange de cassettes par recombinase (RMCE) permet l'échange de vastes régions génomiques. Cette technologie est principalement recommandée pour la création de modèles humanisés et de plusieurs mutants à partir d'un même clone de cellules souches embryonnaires parentales.

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Applications de la technologie RMCE

1) Création de modèles humanisés à l'aide de la technologie RMCE

La technologie RMCE permet de remplacer de vastes régions du génome de la souris par les régions correspondantes du génome humain. La technique RMCE peut être facilement adaptée spécifiquement à la création de modèles humanisés à partir d'ADN génomique. Grâce à cette approche, un gène d'intérêt et son promoteur peuvent être facilement humanisés afin de reproduire un profil d'expression humain chez la souris. En utilisant de l'ADN génomique, toutes les isoformes humaines peuvent théoriquement être exprimées.

Remplacement d'un grand segment du génome de la souris par une séquence humaine : H.A. Wallace et al. Cell 2006. Manipulation du génome de la souris pour réaliser des remplacements synténiques fonctionnels précis par des séquences humaines.

2) Création de modèles mutants en vue d'une étude comparative de plusieurs mutations

Grâce à la technologie RMCE, genOway est en mesure d'introduire une mutation dans un clone de cellules ES parentales. À partir de ce même clone de cellules parentales, nous pouvons ensuite générer facilement d'autres modèles mutants, ce qui permet au client de gagner du temps et de réaliser des économies.

Grâce à cette approche, les chercheurs peuvent comparer plusieurs mutations en utilisant différents vecteurs de ciblage au sein d’un même clone parental de cellules ES. Ces lignées cellulaires mutantes uniques peuvent ensuite être utilisées pour créer des lignées de souris mutantes uniques. Étant donné qu’il est possible de créer plusieurs lignées cellulaires et de souris mutantes à partir d’une seule lignée clonale parentale de cellules ES, la technique RMCE est à la fois rentable et fiable. De plus, la méthode RMCE offre un grand potentiel pour permettre aux chercheurs d’analyser comparativement des mutants, de caractériser les fonctions spécifiques à certains domaines des protéines d’intérêt, de générer des mutations ponctuelles, de générer des mutations génétiques de grande ampleur et de remplacer intégralement un gène de type sauvage par un autre gène d’intérêt. Par ailleurs, lorsque les chercheurs utilisent la même lignée clonale parentale de cellules ES, ils sont en mesure de mener des études portant sur plusieurs modèles « knock-in » et comparant différents modèles « knock-in ».

Remplacement d'un gène de souris par des variantes humaines avec un rendement élevé : C.M. Chen et al., PLoS One, 2012. Importance fonctionnelle des mutations du domaine SRJ dans le gène CITED2.

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Quels sont les avantages de la technologie RMCE ?

• La RMCE est plus rapide et plus sûre que la recombinaison homologue

• Le RMCE cible spécifiquement les échanges entre deux gènes

• La technologie RMCE permet d'humaniser des loci en remplaçant le gène de souris par le gène humain orthologue.

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Comment ça marche ?

La technologie RMCE repose sur la génération d’une lignée de cellules ES parentales modifiées génétiquement par l’introduction d’un transgène flanqué de sites de recombinase spécifiques (par exemple, loxP, lox511). genOway peut ensuite créer un plasmide d’échange contenant un deuxième transgène (également flanqué de sites de recombinase spécifiques). Le plasmide d'échange et le transgène sont transfectés dans la lignée de cellules ES parentales en présence d'un plasmide auxiliaire exprimant une recombinase (par exemple, Cre). La recombinase catalyse un échange entre le premier transgène de la cellule ES et le transgène du plasmide d'échange, achevant ainsi le transfert génétique souhaité.

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Les licences genOway protègent vos découvertes et vos travaux de recherche

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