Modèle préclinique de souris humanisée « genO‑hCD4 »

Validation de la ligne de base

• Le CD4 humain remplace le CD4 murin. Les souris homozygotes genO‑hCD4 humanisées expriment le CD4 humain dans les PBMC. Aucune expression du CD4 murin n'est observée.

  Des échantillons sanguins provenant de souris humanisées de type sauvage et homozygotes pour le gène genO‑hCD4 ont été marqués à l'aide d'une combinaison d'anticorps monoclonaux (anti-CD4 murin, anti-CD4 humain), puis analysés par cytométrie en flux.

  

• Répartition inchangée des cellules immunitaires. Les souris humanisées homozygotes genO‑hCD4 présentent les mêmes fréquences de lymphocytes B, de cellules NK et de lymphocytes T dans la rate.

  Les splénocytes sont colorés à l'aide de différentes combinaisons d'anticorps monoclonaux afin d'évaluer les fréquences des sous-populations lymphocytaires mesurées par cytométrie en flux. Les barres noires représentent les valeurs observées chez les souris de type sauvage et les barres hachurées celles observées chez les souris humanisées genO‑hCD4.

  

• Validation approfondie

• Profil d'expression des cytokines conservé. Les souris humanisées homozygotes genO‑hCD4 présentent une expression des cytokines similaire après stimulation par la ConA.

  Les concentrations d’IL-2, d’IFN-γ et d’IL-4 dans les surnageants de culture de splénocytes de souris stimulés par la Con A sont mesurées à l’aide d’un kit Luminex 3-Plex. Les barres noires représentent les valeurs obtenues pour les souris de type sauvage et les barres hachurées représentent les données relatives aux souris humanisées genO‑hCD4.

  

• Validation approfondie

• Production d'Ig similaire. Les souris humanisées homozygotes genO-hCD4 présentent un isotypage anti-KLH similaire à celui des souris de type sauvage.

  Les anticorps polyclonaux IgG1 et IgG2b spécifiques de l'anti-KLH ont été dosés par ELISA de type « sandwich » dans le sérum de souris 28 jours après immunisation avec du KLH et du CFA. Des échantillons de sérum provenant de souris de type sauvage (WT) ou de souris homozygotes genO‑hCD4 humanisées (HO CD4) ont été analysés à différentes dilutions, dont les résultats ont été représentés graphiquement en fonction des valeurs de DO.

  

• La distribution des lymphocytes T ^CD4+ en réponse à un traitement par inhibiteurs de points de contrôle immunitaires (ICI) peut être suivie chez les souris genO-hCD4 à l'aide de radiotraceurs

  Des souris genO-hCD4 ont été inoculées avec des tumeurs PyMT, et l’infiltration de cellules immunitaires ^CD4+ au cœur de la tumeur a été mise en corrélation avec la sensibilité au traitement par αPD-1/α4-1BB. Les tumeurs ont été classées comme « enrichies » en lymphocytes T, « dépourvues » de lymphocytes T ou « désertées » par les lymphocytes T. La distribution des lymphocytes T ^CD4+ au sein de la tumeur a été quantifiée à partir du rapport entre la fixation ^{du 64Cu-CD4-Nb1}en TEP au cœur de la tumeur et à sa périphérie.