前臨床用ヒト化genO-hCD4マウスモデル

ベースライン検証

• ヒトCD4がマウスCD4に置き換わっている。ホモ接合体のgenO‑hCD4ヒト化マウスでは、PBMCにおいてヒトCD4の発現が認められる。マウスCD4の発現は認められない。

  野生型およびホモ接合型genO‑hCD4ヒト化マウスから採取した血液サンプルを、mAb（抗マウスCD4、抗ヒトCD4）の組み合わせで染色し、フローサイトメトリーにより解析した。

  

• 免疫細胞の分布に変化は見られない。ホモ接合型genO‑hCD4ヒト化マウスでは、脾臓におけるB細胞、NK細胞、T細胞の頻度に変化は見られない。

  脾細胞をさまざまなモノクローナル抗体の組み合わせで染色し、フローサイトメトリーを用いてリンパ球サブセットの頻度を評価した。黒い棒グラフは野生型マウスの値を示し、ハッチングが施された棒グラフはgenO‑hCD4ヒト化マウスの値を示している。

  

• 拡張バリデーション

• 保存されたサイトカイン発現プロファイル。ホモ接合型genO-hCD4ヒト化マウスでは、ConA刺激後に同様のサイトカイン発現が認められる

  Con Aで刺激したマウス脾細胞の培養上清中のIL-2、IFN-γ、およびIL-4の濃度は、3-Plex Luminexキットを用いて測定した。黒い棒グラフは野生型マウスの値を示し、ハッチングが施された棒グラフはgenO‑hCD4ヒト化マウスのデータを示している。

  

• 拡張バリデーション

• 同様のIg産生。ホモ接合型genO‑hCD4ヒト化マウスは、野生型マウスと同様の抗KLHアイソタイピングを示す。

  KLHおよびCFAによる免疫接種後28日目のマウスの血清中における、抗KLH特異的IgG1およびIgG2bポリクローナル抗体を、サンドイッチELISA法により測定した。野生型（WT）またはホモ接合型genO‑hCD4ヒト化マウス（HO CD4）の血清サンプルを、さまざまな希釈倍率で測定し、その希釈倍率と吸光度（OD）値をプロットした。

  

• genO-hCD4マウスでは、放射性トレーサーを用いて、ICI療法に対するCD4⁺T細胞の分布を追跡することができる

  genO-hCD4マウスにPyMT腫瘍を移植し、腫瘍中心部へのCD4⁺免疫細胞の浸潤とαPD-1/α4-1BB療法に対する感受性との相関関係を調べた。腫瘍は、T細胞「豊富型」、T細胞「排除型」、T細胞「欠乏型」に分類された。 腫瘍内におけるCD4⁺T細胞の分布は、腫瘍中心部と腫瘍周辺部における⁶⁴Cu-CD4-Nb1 PET取り込みの比率によって定量化された。