前臨床用ヒト化genO‑hCD4マウスモデル

ベースラインの妥当性確認

• ヒトCD4がマウスCD4に置き換わっている　ー　genO‑hCD4ヒト化マウスでは、PBMCにおいてヒトCD4の発現が認められるが、マウスCD4の発現は認められない

  野生型およびホモ接合体 genO‑hCD4 ヒト化マウスからの血液サンプルを、mAb（抗マウスCD4、抗ヒトCD4）の組み合わせで染色し、フローサイトメトリーにより解析した。

  

• 免疫細胞の分布に変化は見られない　ー　genO‑hCD4ヒト化マウスでは、脾臓におけるB細胞、NK細胞、T細胞の頻度に変化は見られない

  脾細胞をさまざまなモノクローナル抗体の組み合わせで染色し、フローサイトメトリーを用いてリンパ球サブセットの頻度を評価した。黒い棒グラフは野生型マウスの値を示し、ハッチングが施された棒グラフはgenO‑hCD4ヒト化マウスの値を示している。

  

• 拡張バリデーション

• 保存されたサイトカイン発現プロファイル　ー　genO-hCD4ヒト化マウスでは、ConA刺激後に同様のサイトカイン発現が認められる

  Con Aで刺激したマウス脾細胞の培養上清中のIL-2、IFN-γ、およびIL-4の濃度は、3-Plex Luminexキットを用いて測定した。黒い棒グラフは野生型マウスの値を示し、斜線入りの棒グラフはgenO‑hCD4ヒト化マウスのデータを示している。

  

• 拡張バリデーション

• 同様のIg産生　ー　genO‑hCD4ヒト化マウスは、野生型マウスと同様の抗KLHアイソタイピングを示す

  KLHおよびCFAによる免疫接種後28日目のマウスの血清中において、抗KLH特異的IgG1およびIgG2bポリクローナル抗体をサンドイッチELISA法により測定した。野生型（WT）またはホモ接合型genO-hCD4ヒト化マウス（HO CD4）の血清サンプルを、さまざまな希釈倍率で測定し、そのOD値と希釈倍率の関係をプロットした。

  

• genO-hCD4マウスでは、放射性トレーサーを用いて、ICI療法に対するCD4⁺T細胞の分布を追跡することができる

  genO-hCD4マウスにPyMT腫瘍を移植し、腫瘍中心部へのCD4⁺免疫細胞の浸潤とαPD-1/α4-1BB療法に対する感受性との相関関係を調べた。腫瘍は、T細胞「豊富型」、T細胞「排除型」、T細胞「欠乏型」に分類された。 腫瘍内におけるCD4⁺T細胞の分布は、腫瘍中心部と腫瘍周辺部における⁶⁴Cu-CD4-Nb1 PET取り込みの比率によって定量化された。