IL-4はTh2細胞の典型的なマーカーであり、免疫応答を体液性エフェクター応答へと偏向させることで、ナイーブヘルパーT細胞のTh2細胞への分化を誘導することが知られている。

ランダム挿入によって作製された他の既存のIL-4レポーターモデルとは対照的に、このノックインマウス系統はIL-4の生理的な発現を維持しており、Th2活性のモニタリングを可能にする

特長

内因性IL-4発現の調節は行われない:

  • 内因性IL-4は発現しており、機能も有している:内因性IL-4遺伝子座の3'UTRにレポーター遺伝子が挿入された
  • 挿入された遺伝子操作は制御されている
  • レポーターはIL-4の発現を忠実に反映している

Th2分極モニタリング研究に適したモデル:

  • eGFPの発現をモニタリングすることで、IL-4を発現する細胞を直接検出することができた(図1)。
  • 免疫系の機能が損なわれていないこと:感染や刺激に対してIL-4の産生が正常に行われていること(図2)
  • Th2細胞の移動および細胞選別の最適なモニタリング

クライアント

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モデルの配送と取り扱いについて

  • 世界中への迅速、規定に準拠した、信頼性の高いドア・ツー・ドア配送
  • AAALAC認定およびPHS保証を受けた専門ブリーダーから供給され、SOPF健康状態が認定されたモデル

ベースラインの妥当性確認

  • 図1)eGFPの発現は、IL-4を発現するT細胞と相関しており、IL-4の産生を反映している

    ‍A: Th1条件とは対照的に、4get細胞のeGFP陽性細胞集団に対してTh2特異的な条件を適用すると、IL-4の産生を反映して、eGFPの発現が著しく増加する。

    ‍精製した、未刺激のCD4+ eGFP-ホモ接合型4get T細胞を、PKH26赤色蛍光色素で標識した。抗原提示細胞の存在下で、Th1、中性、またはTh2の各条件下で細胞を培養し、4日目にCD4+細胞をゲート設定して解析を行った。

    ‍B:Th2条件下でのみ、4get細胞が特異的にIL-4を発現した。

    ‍野生型(+/+、実線バー)、ヘテロ接合体(+/4get、ハッチングバー)、およびホモ接合体(4get/4get、濃い色バー)の4getマウス由来の脾細胞から、補体溶解法によりCD8+細胞を除去し、Th1またはTh2条件下で5日間刺激した。 細胞を洗浄して再刺激し、48時間後に上清を回収し、ELISA法によりIL-4およびIFN-γを測定した。3回繰り返した培養の平均値および正の標準偏差を示している。

  • (図2)4get細胞は、N. brasiliensisの感染に対して応答する能力を保持しており in vivo IL-4を大量に産生することで、その能力を維持している

    感染した4getマウスにおいて、4get細胞はN. brasiliensisの感染に応答してIL-4を産生する。

    ‍ホモ接合体の4getマウスにN. brasiliensisを感染させた。10日後に、肺、腸間膜リンパ節(MLN)、末梢リンパ節(PLN)、および脾臓(SPL)についてFACS解析を行った。前方散乱および側方散乱によるリンパ球ゲートから選別した細胞について、CD4およびeGFPの発現を調べた。 非感染対照マウスは、感染マウスと同じ施設で飼育された。各解析において、3匹のマウスから採取した細胞を混合した。数値は各象限ごとの割合を示す。

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