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誘導型ノックダウン細胞株は、処理を行うことで特定の関心対象を不活性化できるモデルを定義する。
当社は、SMASh技術を用いて、薬剤誘導型タンパク質分解モデルを構築しています。単一の遺伝子改変により、対象タンパク質に自己切断型デグロンタグを付加することで、薬剤処理時にそのタンパク質の誘導型かつ可逆的な分解が可能となります（詳細はこちら）。
genOway社は、特許取得済みのSMASh技術の使用に関する独占的ライセンスを保有しています。（プレスリリースを参照）
誘導型ノックダウン細胞株の長所
- 誘導性かつ可逆的なシステム
- 1つの細胞株＝対象タンパク質の発現レベルが異なる複数のモデル
- 信頼性：各細胞株には、同系対照細胞クローンが対応付けられている
- あらゆる遺伝的背景および細胞タイプにおいて適用可能
誘導型ノックダウン細胞株の限界
- ダウンレギュレーションの効率は、対象となる分子や細胞株によって異なる
- 対象遺伝子の遺伝子改変により、隣接する遺伝子の発現が乱され、非特異的な表現型が誘導される可能性がある
- 多倍体度の高い細胞では困難である
→ 詳細なバイオインフォマティクス、遺伝学的、および文献学的解析を行うことで、リスクを大幅に低減することができます
→ 別のモデルとして、 点変異 を導入して不活性なタンパク質を生成する手法である
概念実証
免疫チェックポイントであるPD-L1は、免疫腫瘍学における治療標的として特定されており、腫瘍学の分野では、このタンパク質を標的とするさまざまな治療法が開発され、成果を上げています。
我々は、マウスのPD-L1機能を不活性化し、SMAShタグ付きヒトPD-L1を過剰発現させるように改変したマウス腫瘍細胞MC38を開発した。これにより、これらの細胞におけるPD-L1の発現を可逆的に停止させ、薬剤投与時にPD-L1を完全に欠損した細胞を得ることができた。
2つの細胞株が樹立された：
- MC38-SMASh-hPD-L1（標的タンパク質のN末端にタグが挿入されたもの）
- MC38-hPD-L1-SMASh（標的タンパク質のC末端にタグが挿入されているもの）
用途
学術研究の場合：
- その遺伝子および／またはタンパク質の主な機能を特定し、研究する
- 遺伝子機能喪失に関する研究
- ヒト疾患のin vitroでの再現
バイオ医薬品の研究開発において：
- in vitroでの標的検証
- 創薬研究やスクリーニングのために、ヒトの疾患を再現する
- 拮抗薬スクリーニング用の陽性対照
- 標的タンパク質の分解を模倣したin vitroモデル
検証
MC38-hPDL1タグ付き細胞株は、ヒトPD-L1を発現する
ヒトPD-L1の発現をフローサイトメトリーにより解析した。陰性対照としてMC38親株を用いた。 ヒト結腸癌細胞株RKOを陽性対照として用いた。これらのタグ付き細胞株はいずれも、検出可能なレベルのヒトPD-L1を発現している。なお、SMAShタグの位置は標的タンパク質の発現レベルに影響を与える可能性があることに留意すべきである。実際、MC38-hPD-L1-SMASh細胞は、MC38-SMASh-hPD-L1細胞よりも高いレベルのヒトPD-L1を発現している。
ヒトのPD-L1発現は、薬剤投与により可逆的に抑制される
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誘導型ノックダウン細胞
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カスタマイズされた細胞株
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