前臨床用ヒト化genO-hCD3εマウスモデル

ベースラインの妥当性確認

• CD3εのヒト化は、成熟過程における胸腺細胞の分布やT細胞上のその発現に変化をもたらさない

  (A) 野生型（WT）およびヒト化ホモ接合型CD3ε（genO‑hCD3ε）マウスから新たに分離した胸腺細胞をフローサイトメトリーで解析し、単一の生存細胞であるCD4⁺CD8⁺（DP）、CD4⁺CD8^-（CD4 SP）、CD4^-CD8⁺（CD8 SP）、CD4^-CD8^-（DN）をゲート設定した。

  (B) 野生型（WT）およびヒト化CD3ε（genO‑hCD3ε）マウスから新たに分離した脾細胞をフローサイトメトリーで解析し、単一の生きたTCRβ⁺、TCRɣẟ⁺、CD4^-CD8⁺（CD8）、CD4⁺CD8^-FoxP3^-（Conv CD4）、CD4⁺CD8^-FoxP3⁺（Treg）

  

• 抗ヒトCD3 SP34クローンは、hCD3εに特異的に結合し、genO‑hCD3εマウスにおいてT細胞の活性化を誘導する

  (A) 野生型（WT）およびヒト化ホモ接合型CD3ε（genO‑hCD3ε）マウスから分離した脾細胞を、抗ヒトCD3抗体（クローンSP34）とともにインキュベートし、フローサイトメトリーにより解析を行った。解析では、単一の生存CD4⁺CD8^-FoxP3^-（Conv CD4）、CD4^-CD8⁺（CD8）、CD4⁺CD8^-FoxP3⁺（Treg）にゲート設定した。

  (B) 単離したT細胞をCTVで標識し、コーティングされた抗ヒトCD3（SP34）をさまざまな濃度で添加して72時間活性化させた。

  (C) 単離したT細胞を、さまざまな濃度のコーティング済み抗ヒトCD3（SP34）を用いて72時間活性化させた。上清中のIFN-γ濃度をELISA法により定量した。

  

• 拡張バリデーション

• CD3および腫瘍抗原を標的とするT細胞エンゲージャーは、生体内において用量依存的な抗腫瘍効果を示した。

  T細胞エンゲージャーの有効性評価。（A）in vivo実験の設計。（B）野生型マウスおよび（C）genO‑hCD3εマウスにおける腫瘍増殖曲線。

  

• 拡張バリデーション

• genO-CD3εマウスに新規TCE（PF-0726437）を投与すると、腫瘍へのT細胞の浸潤が増加する

  抗PD-1抗体とPF-07260437を併用した群では、腫瘍内へのCD3およびCD8 T細胞の浸潤が著しく増加しており、これは試験対象となったTCEの作用機序を浮き彫りにしている。

  

• genO-hCD3εマウスおよびWTマウスにおいて、さまざまなCD3二特異性抗体のPKプロファイルを測定した。

  各マウスには、ヒトCD3およびマウスCD20を標的とする二重特異性T細胞エンゲージャー（hCD3.1-mCD20）、hCD3を標的とし、無関係な標的アーム（KLH）を含む二重特異性抗体（bsAb）、あるいはマウスCD3を標的とする代替二重特異性抗体（m2C11-mCD20またはm2C11-KLH）を投与した。 Zornet al., 2022 を改変。