Modèle murin préclinique genO-hCD3ε

Validation de la ligne de base

• L'humanisation du CD3ε ne modifie pas la répartition des thymocytes au cours du processus de maturation ni son expression sur les lymphocytes T

  (A) Des thymocytes fraîchement isolés provenant de souris de type sauvage (WT) et de souris homozygotes humanisées pour le gène CD3ε (genO‑hCD3ε) ont été analysés par cytométrie en flux et triés selon les populations suivantes : ^cellules vivantes ^CD4+CD8+ (DP), ^CD4+CD8- (CD4 SP), ^CD4-CD8+ (CD8 SP) et ^CD4-CD8- (DN)

  (B) Des splénocytes fraîchement isolés provenant de souris de type sauvage (WT) et de souris homozygotes humanisées pour le gène CD3ε (genO‑hCD3ε) ont été analysés par cytométrie en flux, et les sous-ensembles de lymphocytes T ont été sélectionnés parmi les cellules vivantes individuelles ^TCRβ+, ^TCRɣẟ+, ^CD4-CD8+ (CD8), ^{CD4+CD8-FoxP3-} (CD4 conventionnel), ^{CD4+CD8-FoxP3+} (Treg)

  

• Le clone SP34 anti-CD3 humain se lie spécifiquement à l'hCD3ε et induit l'activation des lymphocytes T chez les souris genO‑hCD3ε

  (A) Des splénocytes fraîchement isolés provenant de souris de type sauvage (WT) et de souris homozygotes humanisées pour le gène CD3ε (genO‑hCD3ε) ont été incubés avec un anticorps anti-CD3 humain (clone SP34), puis analysés par cytométrie en flux et sélectionnés sur la base de ^cellules vivantes isolées ^{de type CD4+CD8-FoxP3-} (Conv CD4), ^CD4-CD8+ (CD8), ^{CD4+CD8-FoxP3+} (Treg)

  (B) Les lymphocytes T isolés ont été marqués au CTV et activés avec différentes concentrations d'anticorps anti-CD3 humain (SP34) enrobés pendant 72 heures

  (C) Les lymphocytes T isolés ont été activés pendant 72 heures avec différentes concentrations d'anticorps anti-CD3 humain (SP34) couché. Le taux d'IFN-γ dans le surnageant a été quantifié par ELISA.

  

• Validation approfondie

• Un activateur de lymphocytes T ciblant le CD3 et un antigène tumoral a montré un effet antitumoral dépendant de la dose in vivo

  Évaluation de l'efficacité des activateurs de lymphocytes T. (A) Protocole expérimental pour les expériences in vivo. Courbes de croissance tumorale chez les souris (B) de type sauvage et (C) genO‑hCD3ε.

  

• Validation approfondie

• Le traitement de souris genO-CD3ε par un nouveau TCE (PF-0726437) entraîne une augmentation de l'infiltration des lymphocytes T dans les tumeurs

  On observe une augmentation significative de l'infiltration de lymphocytes T CD3 et CD8 dans les tumeurs du groupe traité par l'anti-PD-1 et le PF-07260437, ce qui met en évidence le mécanisme d'action de l'agent anticancéreux testé.

  

• Le profil PK de différents anticorps bispécifiques anti-CD3 a été mesuré chez des souris genO-hCD3ε et WT.

  Les souris ont été traitées avec un activateur bispécifique de lymphocytes T ciblant le CD3 humain et le CD20 murin (hCD3.1-mCD20), un anticorps bispécifique (bsAb) ciblant le hCD3 et contenant un bras de ciblage non pertinent (KLH), ou des anticorps bispécifiques de substitution ciblant le CD3 murin (m2C11-mCD20 ou m2C11-KLH). D'après Zorn et al., 2022.