Modèle murin préclinique genO-panhCD3 (hCD3edg)

Validation de la ligne de base

• La distribution des lymphocytes T n'est pas modifiée par l'humanisation du CD3γδε, ce qui suggère que le CD3 est fonctionnel

  Des splénocytes fraîchement isolés provenant de souris de type sauvage (WT) et de souris genO‑panhCD3 ont été analysés par cytométrie en flux et triés selon les critères suivants : ^TCRβ+ (TCRβ), ^TCRγδ+ (TCRγδ), ^{TCRβ+ CD8+} (CD8), ^{TCRβ+CD4+CD25+FoxP3-} (CD4 conventionnel) ou ^{TCRβ+CD4+CD25+FoxP3+} (Treg).

  

• L'anti-CD3 induit l'activation des lymphocytes T – le complexe TCR/CD3 est fonctionnel

  Des lymphocytes T fraîchement isolés chez des souris genO-panhCD3 ont été marqués au CTV et activés avec des anticorps anti-CD3 humains enrobés (SP34.2 ou OKT3) pendant 72 h, puis analysés par cytométrie en flux. Les cellules ont été sélectionnées en fonction de leur statut de ^{cellules CD4+} vivantes isolées (CD4) (A) ou de ^{cellules CD8+} vivantes (lymphocytes T CD8) (B). La concentration en IFN-γ a été dosée dans le surnageant par ELISA (C).

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• Validation approfondie

• L'AZD5863 améliore l'inhibition de la croissance tumorale lorsqu'il est associé à un anti-PD-1 ou à un traitement CAPOX + anti-PD-1 chez des souris genO‑panhCD3

  Des souris genO‑panhCD3 ont reçu une greffe de 1,^{5 × 10⁶} cellules^MC38-mCLDN18 .2 (lignée cellulaire d’adénocarcinome du côlon murin, n = 10 souris par groupe). Les souris ont été traitées avec différentes combinaisons thérapeutiques associant une chimiothérapie (oxaliplatine), le protocole CAPOX (capécitabine), un anticorps anti-mPD-1 et l’AZD5863 (activateur des lymphocytes T).

  

• Validation approfondie

• L'OKT3 induit une libération de cytokines et des signes cliniques associés chez les souris genO-panhCD3

  Des souris genO-panhCD3 ont reçu une injection intraveineuse d'anticorps anti-CD3 humain (OKT3, 250 μg/kg). La libération de cytokines et le poids corporel ont été mesurés à différents moments après l'injection.

  

• Poids moyen des souris genO-panhCD3 (mâles et femelles)

  

• Traitement par un engager bispécifique autoantigène-cellule T (BiAATE) contre les maladies auto-immunes chez des souris genO-panhCD3

  Des souris genO-panhCD3 ont été immunisées avec 50 µg de PLA2R recombinante. 28 et 35 jours plus tard, les souris ont reçu 1 mg/kg de BiAATE ou un véhicule, et les taux d'IgG dirigés contre la PLA2R ont été mesurés au fil du temps. Cela démontre que le BiAATE peut être utilisé pour éliminer les lymphocytes B autoréactifs, contribuant ainsi au traitement des maladies auto-immunes.

  D'après Perico et al., 2024

  

• Le profil d'expression de hCD3 est identique à celui de mCD3

  Les splénocytes fraîchement isolés ont été triés pour ne retenir que les cellules T vivantes ^{TCRβ+ TCRγδ- CD8+} (lymphocytes T CD8) et les cellules ^{TCRβ+ TCRγδ- CD4+CD25+FoxP3-} (lymphocytes T CD4). L'expression du CD3 humain a été quantifiée soit à l'aide de l'anticorps CD3 SP34.2, soit à l'aide de l'anticorps OKT3.