前臨床用ヒト化genO-hTIGITマウスモデル

ベースライン検証

• 脾臓の免疫細胞集団におけるhTIGITの発現

  WTマウスまたはgenO-hTIGITマウスから新たに分離した脾細胞を、mIL-2の存在下でαCD3/αCD28を用いて48時間活性化させた。 ^{生存細胞であるCD3+CD4+CD8-D25+FoxP3+}（Treg細胞）、^{CD3+CD4+CD8-FoxP3-}（^ConvCD4+）、^CD3+CD4-CD8+（^CD8+細胞）、^{およびCD3-NK1}.¹⁺（NK細胞）をゲート設定した。

  

• TIGITの刺激は、in vitroにおいてCD4+ T細胞の増殖を抑制し、IFN-γの産生を減少させる

  A) Isolated T cells from WT and genO-hTIGIT mice were labelled with CTV and activated with αCD3 in presence of rmCD155 or control. Cell proliferation was assessed by flow cytometry after 4 days. Cells gated on single live CD3⁺ CD4⁺ CD8^- T cells. 2way ANOVA test, ** p < 0,005 ,*** p < 0,001 vs. αCD3

  B) Isolated T cells from WT and genO-hTIGIT mice were activated with αCD3 in presence of rmCD155 or control. Secreted IFN-γ was quantified in the supernatant by ELISA after 4 days. 2way ANOVA test, p < 0,001 vs. αCD3

  報告されているように、mCD155はhTIGITと交差反応を示す（Staniestkyet al., Eur. J. Imm., 2013）。

  

• 拡張バリデーション

• 抗mPD-1抗体との併用療法におけるチラゴルマブは、MC38を移植したgenO-hTIGITマウスにおいて抗腫瘍効果を示す

  genO-hTIGITマウスに1×10⁶個のMC38細胞を皮下移植した。腫瘍体積が100mm³に達した時点で、genO-hTIGITマウスに対し、抗mPD-1（10 mg/kg）、チラゴルマブ（40 mg/kg）、または併用療法を、週2回、3週間にわたり投与した。 腫瘍体積が1200mm³に達するまで、週2～3回、腫瘍体積の測定を行った。

  

• 拡張バリデーション