前臨床用ダブルヒト化 genO-panhCD3/hCD28 マウスモデル

ベースライン検証

• genO-panhCD3/hCD28マウスにおけるhCD3およびhCD28の発現パターンは、野生型マウスにおけるmCD3およびmCD28の発現パターンを再現している

  分離直後の脾細胞におけるCD3（A）およびCD28（B）の染色。単一の生存細胞に対して、CD4⁺CD8^- CD25^-FoxP3^-（従来型CD4）、CD4⁺CD8^-CD25 ⁺FoxP3⁺（Treg）、およびCD4^-CD8⁺（CD8）のゲート設定を行った。

  脾臓におけるT細胞のサブポピュレーションを解析した（C）。生存細胞を対象に、TCRβ⁺CD19^-（TCRβ細胞）、CD4⁺CD8^-CD25^-FoxP3^-（Conv CD4）、CD4⁺CD8^-CD25⁺FoxP3⁺（Treg）、CD4^-CD8⁺（CD8）のゲート設定を行った。

  抗マウスCD3抗体：クローン145-2C11、抗ヒトCD3抗体：クローンOKT3。

  抗マウスCD28抗体：クローンE18、抗ヒトCD28抗体：クローンCD28.2。

  

• CD4 T細胞の増殖に対するCD28の相乗効果

  CellTrace^™Violetで標識し、固定化αCD3（1μg/mL）を用いて活性化させたT細胞について、αCD28（2.5μg/mL）の有無にかかわらず、組換えIL-2（10ng/mL）の存在下で処理を行った。CD4陽性細胞の増殖をフローサイトメトリーにより評価した。

  

• 拡張バリデーション

• IFN-γおよびIL-2産生に対するCD28の相乗効果

  固定化αCD3（1μg/mL）を用いて、αCD28（1または2.5μg/mL）の有無にかかわらず、また組換えIL-2（10ng/mL）の存在下で活性化された、磁気分離されたT細胞。分泌されたIFN-γおよびIL-2は、ELISA法により定量した。

  

• 拡張バリデーション

• genO-panhCD3/hCD28マウス（雄および雌）の平均体重